产品简介：

万生昊天的Phos-key凝胶配制试剂盒（固定浓度）用于配制Phos-key SDS-PAGE凝胶，提供上层胶（浓缩胶）和下层胶（分离胶）的预混溶液以及Phos-key Acrylamide和ZnCl2。在常规SDS-PAGE凝胶中加入Phos-key Acrylamide和ZnCl2即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。在电泳时，固定在凝胶上的Phos-key复合物可以特异性结合磷酸化蛋白，使得磷酸化蛋白电泳迁移率降低，从而实现磷酸化和非磷酸化蛋白的分离。能检测不同形式的磷酸化蛋白，不受磷酸化抗体限制，可用于免疫印迹、质谱分析等。本产品提供中性缓冲体系，确保高稳定性和清晰的分离效果。本产品兼容 Tris-Glycine 缓冲体系，使用时需自备制胶器具和去离子水。

产品特点：

◆ 无放射性、无特殊仪器需求；

◆ 实验操作与普通SDS-PAGE一样；

◆ 结合特异性与磷酸化氨基酸的种类无关，适用于所有形式的磷酸化蛋白检测；

◆ 可检测和定量蛋白质的多种磷酸化形式，使用非磷酸化抗体可同时检测磷酸化与非磷酸化蛋白；

◆ 磷酸基团数量相同，磷酸化位点不同时也可以分离；

◆ 添加Phos-key Acrylamide和ZnCl2试剂，可自行调整优化磷酸化和非磷酸化蛋白分离效果；

◆ 与 Tris-Glycine 缓冲体系兼容；

◆ 采用了改良配方，制备好的Phos-key SDS-PAGE凝胶可在4℃下保存3个月（置于凝胶保存液中）；

◆ 提供6%、8%、10%、12%、15%等多种凝胶浓度。

保存条件：

1.配胶试剂盒2-8℃避光保存，有效期为6个月。

2.PAGE 胶凝固剂于-20℃保存，同时尽量减少室温存放时间，以防失效。

3.5 mM Phos-key Acrylamide溶液，需2-8℃避光保存。

注意事项：

1． 样品制备；

a.确保样本中不含有 EDTA 等金属离子螯合剂

b.样品中含有的还原剂、变性剂、螯合剂、钒酸等会使电泳条带发生弯曲或者拖尾，可通过TCA沉淀或透析脱盐降低杂质含量

c.避免样品中含有高浓度的还原剂，变性剂，表面活性剂等；β-巯基乙醇浓度不高于0.2 M（或者5%）

d.ATP使用浓度在2.0 mM时，对实验结果无显著影响，具体使用范围尚不清楚 e.样品可以为纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液，且样品来源无物种特异性

e.样品可以为纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液，且样品来源无物种特异性

2． 通常情况下，纯化蛋白上样量为5 - 10 μg，组织或细胞提取液上样量为15 - 30 μg，具体需要根据磷酸化蛋白表达进行调整；

3． 一般预染Marker在Phos-key凝胶中会产生条带弯曲，建议使用万生昊天的Phos-key专用Marker (MKPX015)；蛋白Marker仅作为电泳和转膜效率的指示，不能作为蛋白分子量的参考；

4． Phos-key凝胶除了考马斯亮蓝染色之外，也可使用负染、银染、荧光染色等方法进行染色；

5． 如染色的背景高，可用 EDTA 处理消除凝胶中的金属离子后再染色；

6． 上层胶溶液和下层胶溶液中含有Acr和Acr-Bis，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内；

7． PAGE 胶凝固剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整；

8． 仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。不得存放于普通住宅内；为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和实验服装进行操作。

9． 为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和实验服装进行操作。